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血清常用知識

培養液出現沉淀,但pH值不變 

可能原因

(1)洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽,將培養基成分沉淀下來

(2)冰凍保存培養液

 

建議解決方法

(1)用去離子水反復沖洗玻璃器皿,然后滅菌。

(2)將培養液加熱到37℃,搖動使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養液。

血清沉淀比較多

 血清是天然制品,沒有經過預老化(反復凍融),放置在2-8℃進行融化時,血清中的蛋白(纖維蛋白等)或脂類有可能凝集析出,出現沉淀或者混濁,這種現象對于多數血清來講是正常的,并不會影響血清對細胞的促生長作用,更與血清品質無關。此外,熱滅活,冷凍的血清直接放到室溫或者37℃水浴鍋中融化(錯誤的血清融化方式),37℃培養,反復凍融,融化過程沒有搖勻,gamma輻照,長期存放在2-8℃等操作都會增加血清中的沉淀。建議客戶將血清放置在-20℃,避免反復凍融,如果一次不能用完一瓶,將冷凍的血清放置在2-8℃至完全融化(期間間斷搖晃均勻),無菌操作進行分裝,分裝后的血清-20℃冷凍保存。

如何處理沉淀比較多的血清

對細胞生長無明顯影響,可以不予處理。

如果進行處理,可將融化的血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起使用。不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞的過濾膜,造成血清的浪費和引入不必要的污染。

培養細胞不貼壁

可能原因

(1)胰蛋白酶消化過度

(2)支原體污染    

(3)培養瓶瓶底不干凈

(4)培養液pH值過堿(NaHCO3分解)

(5)消化液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當

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