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免疫組化操作規程

免疫組化操作規程
一儀器設備
1、18cm不銹鋼高壓鍋和電爐

2、醫用微波爐

3、水浴箱;

4、冰箱-18-4

5、濕盒

6、耐高溫塑料切片架

7、可調微量移液器

8、定時器

9、pH計

二試劑
1、PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.27.4)NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO4 4.3mmol/LKH2PO4 1.4mmol/L
2、檸檬酸鹽緩沖液CBpH6.00.01mol/L1000ml配制檸檬酸三鈉 3g檸檬酸 0.4g
3、酶消化液 a0.1%胰蛋白酶液用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制 b0.4%胃蛋白酶液用0.1N的HCl配制

三操作流程
1 、脫蠟和水化
脫蠟前將組織芯片放在60恒溫箱中烘烤30分鐘
(1)置于二甲苯I中浸泡10分鐘在二甲苯II中再浸泡10分鐘
(2)無水乙醇I中浸泡5分鐘在無水乙醇II中再浸泡5分鐘
(3)95%乙醇中浸泡5分鐘
(4)85%乙醇中浸泡5分鐘
(5)70%乙醇中浸泡5分鐘
(6)蒸餾水中浸泡5分鐘

2、抗原修復
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片
1、抗原熱修復
A  高溫高壓熱修復 取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液pH6.0于壓力鍋中大火加熱至沸騰將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑料切片架上放入已沸騰的緩沖液中蓋上鍋蓋扣上壓力閥繼續加熱至噴氣從噴氣開始計時1-2分鐘后壓力鍋離開熱源冷卻至室溫取出玻片先用蒸餾水洗兩次后用PBS洗5分鐘
B  微波熱修復取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液pH6.0于微波盒中微波加熱至沸騰將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑料切片架上放入已沸騰的緩沖液中中高檔繼續處理10-15分鐘取出微波盒冷卻至室溫取出玻片先用蒸餾水洗兩次后用PBS洗5分鐘
C  酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液胰蛋白酶使用前預熱至37切片也預熱至37消化時間約為5~30分鐘胃蛋白酶消化37時間為10-30分鐘

3、化學染色

 
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