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  單克隆抗體制備
 

單克隆抗體制備

服務內容

本項技術服務主要包括:    

    - Balb/c純系小鼠免疫;

    - 脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞的融合;

    - 抗體產生細胞的ELISA篩選;

    - 抗體產生細胞的亞克隆與擴增;

- 指定細胞克隆的體外培養或腹水瘤接種法生產單克隆抗體。

1、抗原表位設計

使用特有分析軟件,以在線分析方法為輔助,綜合蛋白三維結構、活性位點、親水性等因素,多參數預測抗原表位,大大提高了抗原表位的可靠性,為后續的抗體制備提供了有力保證。

2、多肽合成

包括:標準肽合成、肽修飾、不同純度多肽處理、抗原多肽及其與蛋白的交聯等。

3、重組蛋白抗原制備

    1)重組質粒構建

    2)質粒轉化

    3)誘導表達

    4)蛋白純化

    5)蛋白鑒定

    所得到的重組蛋白,具有較高的純度和活性,可用于免疫動物以獲得單克隆抗體。

4、雜交瘤制備

    1)免疫動物:免疫動物的選擇根據骨髓瘤細胞株的來源而定,常用的骨髓瘤細胞均來自Balb/c小鼠。免疫原可為:可溶性抗原、顆粒性(細胞)抗原。

    2)骨髓瘤細胞的培養。

    3)飼養細胞的制備。

    4)細胞融合。

    5HAT篩選。

5、篩選分泌抗體的雜交瘤細胞

一般常用的有:免疫熒光、放射免疫(RIA)、組織化學法和酶聯免疫分析(ELISA)法等,以ELISA方法最為常用。

6、雜交瘤細胞的克隆化培養

經檢測的雜交細胞雖然分泌抗體,但它可能是一個雜交細胞,也可能是多個雜交細胞的后代所分泌的抗體,因此必須進行克隆化培養,以獲得得一個既有克隆原性又分泌抗體的雜交瘤細胞株。

7、單克隆抗體的大量制備

雜交瘤細胞建成之后,需要制備大量抗體以備使用。把雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔內,在雜交瘤生長的同時滲出大量腹水,腹水含有抗體,每毫升可達到毫克水平,是目前廣泛采用的方法。

8、抗體純化

通常講單克隆抗體已經是很純的,在實驗研究中可以使用,但由于它的來源不同,可能會含有培養

9、抗體鑒定

雜交瘤細胞建株后,還需對其所分泌的單克隆抗體的理化性質及對抗原的特異性等進行鑒定,通常需進行以下工作:抗原本身的IgG亞類測定;所抗抗原分子量的測定;Western blot鑒定;ELISA效價鑒定等。

單克隆抗體制備流程周期:16-24

我們提供小鼠單抗的制備和純化服務,可根據客戶的需求篩選一株或者一對單抗。

 

 
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